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    數字PCR儀實現了定量及稀有等位基因的檢測

    發布時間:2021-04-07瀏覽:160次
      數字PCR儀是一種核酸檢測和定量分析的新方法,可以作為傳統實時定量PCR的替代方法,以實現一致定量及稀有等位基因的檢測。數字PCR的工作原理在于將DNA或cDNA樣品分割為許多單獨、平行的PCR反應,部分這些反應包含了靶標分子(陽性),而其他不包含(陰性)。單個分子可以被擴增一百萬倍或更多。在擴增期間,TaqMan化學試劑及染料標記探針可用于檢測特定序列的靶標。當不存在任何靶標序列時,沒有信號累積。PCR分析后,陰性反應片段用于生成樣品中靶標分子的一致計數,而無需標準品或內標。
      納流芯片的使用提供了便捷和直觀的機制來同時平行運行上千個PCR反應。每個孔都加入了樣品、擴增混合物和TaqMan測定試劑的混合物,然后進行單獨分析以檢測存在(陽性)或不存在(陰性)終點信號??紤]到孔可能接收到多個靶標序列分子,使用泊松模型應用了一個校正因子。
      數字PCR儀和試劑能夠提高現有TaqMan測定的性能,從而實現更高的靈敏度、精度和一致定量,使應用從中獲益。
      PCR就是利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內InVitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶進行專一性的連鎖復制。在使用PCR儀的過程中需要注意以下事項:
      1)環境要恒定,運作環境的溫度不能過高或過低,在用空調的房間使用,有些PCR儀有溫度保護程序,在過低的溫度下機器不能啟動。
      2)電源要穩定,工作的電壓不能波動過大,波動過大會造成電子器件損壞,一般建議將PCR儀電源接于穩壓電源上。
      3)盡量不要保存過夜,能經常使用就不容易壞。
      4)數字PCR儀在使用前要詳細閱讀使用說明書,遇到不能解決的問題不要隨意拆卸儀表,打電話咨詢廠家或技術支持部門,通過指導進行維修。

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